ELISA試劑盒中抗體有包被抗體和酶標(biāo)抗體,這兩種抗體是一種抗體,前者沒有酶標(biāo),后者用酶進(jìn)行了標(biāo)記.NCM-ELISA一般有一抗和二抗,這兩種抗體不一樣,前者(一抗)一般是鼠抗體或兔抗體,沒有酶標(biāo),相對應(yīng)的二抗一般是羊抗鼠或羊抗兔抗體,用酶進(jìn)行標(biāo)記.也有用馬大規(guī)模備抗體的.TDS-ELISA是三抗體ELISA,第三級的抗體是將信號級聯(lián)放大.以上三種是比較常見的,還有其他一些試劑盒,可參考免疫學(xué)的內(nèi)容.
一、保證ELISA試劑盒安全性的方法:
1.避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體,請盡快用水沖洗。
2.實(shí)驗(yàn)中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。
3.不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。
二、ELISA試劑盒的操作注意事項(xiàng):
1.試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲(chǔ)存,使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,不可保存。
2.實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。
3.不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
4.使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時(shí),避免使用帶金屬部分的加樣器。
5.使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
6.洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
三、ELISA試劑盒的樣品收集、處理及保存方法:
1.血清-----操作過程中避免任何細(xì)胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后,1000×g離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
2.血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。
3.細(xì)胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
4.組織勻漿-----將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘,取上清液
5.保存------如果樣品不立即使用,應(yīng)將其分成小部分-70℃保存,避免反復(fù)冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒,檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。