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ELISA試劑盒試驗中常用到的封閉液配置方法

ELISA試劑盒的實驗中的封閉液小知識：

　　ELISA試劑盒說明上寫封閉液用蔗糖溶液，一般是用BSA或酪蛋白的蛋白分子封閉空白位點，蔗糖封閉的原理：

　　1、elisa實驗中，蔗糖本身沒有封閉作用;

　　2、封閉液一般是BSA、酪蛋白等或者是Tween等。

　　3、加蔗糖的主要目的是保護ELISA板子吸附(包被)的蛋白，起到“保護劑”的作用。

　　4、蔗糖溶液一般在ELISA板子經(jīng)過BSA封閉后加，當然也有將蔗糖加到封閉液中同時進行處理;那一種更好需要你實驗后來驗證。但多數(shù)選擇前者。

　　封閉劑還可用5%的脫脂乳(市售即可)，0.4%的明膠，但是實驗表明前者比較好，后者不容易洗干凈未結(jié)合上的明膠。

　　封閉劑的原理就是與酶聯(lián)板上未結(jié)合抗原或抗體的微孔中用封閉劑封閉上，結(jié)合抗體或抗原的時候就不會產(chǎn)生非特異結(jié)合了，不會影響實驗的準確度。

　　ELISA實驗中緩沖溶液等試劑的配置

　　ELISA實驗中是以抗原和抗體的免疫反應(yīng)為基礎(chǔ)，ELISA試劑以及各種溶液如何配置?近剛做了下ELISA實驗，把各種ELISA配置方法匯總?cè)缦拢?/div>

　　(1)ELISA實驗包被緩沖液(PH9.6 0.05M碳酸鹽緩沖液):

　　NaHCO3 1.59克

　　NaHCO3 2.93克

　　加蒸餾水至1000ml

　　(2)ELISA實驗洗滌緩沖液(PH7.4 PBS)：0.15M

　　KH2PO4 0.2克

　　Na2HPO4·12H2O 2.9克

　　NaCl 8.0克

　　KCl 0.2克

　　Tween-20 0.05%0.5ml

　　加蒸餾水至1000ml

　　(3)ELISA實驗稀釋液：

　　牛血清白蛋白(BSA)0.1克

　　加洗滌緩沖液至100ml

　　或以羊血清、兔血清等血清與洗滌液配成5～10%使用。

　　(4)ELISA實驗終止液(2M H2SO4)：

　　蒸餾水178.3ml，逐滴加入濃硫酸(98%)21.7ml。

　　(5)ELISA底物緩沖液(PH5.0磷酸棗檸檬酸):

　　0.2M Na2HPO4(28.4克/L)25.7ml

　　0.1M檸檬酸(19.2克/L)24.3ml

　　加蒸餾水50ml。

　　(6)ELISA實驗TMB(四甲基聯(lián)苯胺)使用液:

　　TMB(10mg/5ml無水乙醇)0.5ml

　　底物緩沖液(PH5.5)10ml

　　0.75%H2O2 32μl

　　(7)ELISA實驗ABTS使用液:

　　ABTS 0.5mg

　　底物緩沖液(PH5.5)1ml

　　3%H2O2 2μl

　　(8)ELISA實驗封閉液：

　　牛血清白蛋白(BSA)5克

　　加洗滌緩沖液至100ml。

　　值得一提的是有的封閉液中含有脫脂奶粉，不適合長期保存。

　　為了保證ELISA實驗的準確性，實驗操作中加入的緩沖液和各組分一定要，將洗滌液加入酶標板中的時候防止加入的試劑混入另外一個酶標孔，嚴防交叉污染。

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